HEK 293T宿主蛋白酶联检测试剂盒是用来定量分析以HEK 293T为表达细胞的生物药物中宿主蛋白杂质的试剂盒。首先,用不同浓度的HEK 293T标准蛋白制作一条标准曲线,然后再根据标准曲线来分析生物药物中宿主细胞残留蛋白的含量。具体方法为:先将HEK 293T标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗HEK 293T宿主蛋白抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温,宿主细胞蛋白与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原-抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗HEK 293T宿主蛋白的抗体结合并进一步形成更高级的复合物,反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物,静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合,从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质,加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应,待颜色反应一段时间后,终止反应。用酶标仪在450 nm波长下测定其结果,此结果能间接地反应结合到平板上的的宿主细胞蛋白数量的多少,根据HEK 293T宿主蛋白标准曲定量分析生物药物中宿主细胞残留蛋白的含量。
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