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中药丸剂DNA提取的完整步骤

                             

 药丸剂是药材细粉或药材提取物加适宜粘合剂或辅料,制成的球形或类球形的固体制剂,是中成药古老的剂型之一。PCRDNA检测方案正在成为中药材真伪鉴定的金标准,但是加工后的中药丸由于成分复杂,包括粘合剂和辅料对PCR反应有抑制作用,导致DNA检测方法不能有效应用于这个领域。本试剂盒通过自主开发的DNA提取方法,对一些PCR抑制成分进行有效的清洗,从而达到有效的DNA提取纯度。提取的DNA可直接用于PCR反应,为药材的真伪鉴定和掺假检测提供了一个可靠的检测方案。

 

杂质清洗前处理

将丸剂溶解于我司开发的清洗剂A,让中药丸在65C的高温下充分溶解于清洗剂,特别让胶状物质也可以溶解。随后再进一步采用清洗剂B去溶解蛋白质、皂甙和油脂等杂质,让纯净的动植物组织可通过高速离心得以有效分离。

 

组织裂解:

将离心所得的沉淀组织通过裂解液进行核酸释放,同时需要考虑有效去除多糖和苯酚类杂质。同时裂解试剂应避免使用苯、氯仿等有害有机溶剂的核酸提取方法。

 

磁珠法提取核酸:

磁珠法核酸提取是近期发展迅速的一种新型核酸提取方法。磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在离液盐(盐酸胍异硫氰酸胍)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出核酸。磁珠法核酸提取不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害减少到最少,符合现代环保理念。同时,磁珠法因为摒弃了离心步骤,非常适合实现高通量的自动化核酸提取。

 

洗脱与质检

TE缓冲液或无菌水洗脱DNA,紫外分光光度计检测A260/A280比值(1.8-2.0为合格)。电泳观察条带完整性,避免拖尾或弥散

 

注意事项:

操作全程戴手套,避免DNA酶污染

深加工食品应加大样品量到1-5g的提取方案,减少因取样误差导致的假阴性结果。


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