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宿主细胞残留DNA为什么要检测,有哪些检测方法呢
  众所周知,大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内,所以除了生物活性外,相关部门对药品中杂质的*非常严格。其中,宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险,一直是监管机构关注的重点。
  
  生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能残余宿主细胞DNA。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险,比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras癌基因。
  
  宿主细胞残留DNA检测的目的:
  
  1、确认纯化工艺合理,能有效去除宿主DNA残余。
  
  2、确认产品中杂质含量符合标准要求。非特异性的DNA检测结果不能区分究竟是生产中污染、检测污染、或是工艺缺陷引起的DNA残余,就无法为解决方案提供有效信息。在严格的生产体系中,残留DNA检测是解决工艺合理性问题,任何外源污染问题都归SOP或GMP管理体系解决。
  
  3、6pg/样品的水平(目前qPCR法灵敏度可达10fg),但是技术上限制,要求待测宿主细胞残留DNA分别不能小于50、150、600bp才能用于杂交法、q-PCR法、阈值法检测,而WHO和FDA可接受的DNA限度内的片段长度<200bp。
  
  实时定量PCR法检测残留DNA的原理和方法:
  
  荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。
  
  定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测宿主细胞残留DNA含量的目的。

上海睿玥实验器材有限公司主营产品:全自动熔点测定仪,梯度PCR基因扩增仪,平行反应合成仪
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