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qPCR荧光定量PCR仪的试验设计评价步骤说明
  荧光定量PCR的检测离不开荧光定量PCR试剂和qPCR荧光定量PCR仪,仪器由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。
  
  对于荧光定量PCR仪的评价,相信大家一定是不知道的。荧光定量PCR仪涉及很多温度、光电信号等,专业性评估,还有就是不知道从哪里入手。今天我们梳理下在核酸检测实验室中如何通过试验来评价荧光定量PCR仪。
  
  qPCR荧光定量PCR仪的试验设计:
  
  一、试验准备
  
  1、有证标准物质:国内外有证标准物质,标准物质类型为质粒DNA或RNA。不推荐使用自制没有进行定量的质控品。
  
  2、荧光染料:可以选用试剂盒自带的ROX染料或购买标准荧光染料。
  
  3、荧光定量PCR方法:需要使用经过验证过的荧光定量方法,扩增效率90%-110%(越接近100%越好);R2大于0.99;检测限应低于10copies/反应。
  
  4、反应体系:质量高口碑好的反应体系。
  
  5、耗材:仪器推荐使用的专用于荧光定量PCR的耗材。
  
  6、反应条件:常规荧光定量PCR反应条件,普通模式,40个循环。不建议使用快速模式和预扩增反应条件。
  
  二、重复性试验
  
  选择高中低浓度标准物质进行检测(推荐浓度为5000copies/反应、500copies/反应和50copies/反应),每个浓度至少5次重复,样品管随机放置在反应板中心和边缘的不同位置。Ct值变异系数不大于3%。
  
  如果qPCR荧光定量PCR仪检测中使用双重或多重荧光检测,可设计如用FAM探针扩增用VIC通道检测,检测结果不应该有高于阈值线的荧光信号。

上海睿玥实验器材有限公司主营产品:全自动熔点测定仪,梯度PCR基因扩增仪,平行反应合成仪
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