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VIRA-PORE COVID类似病毒空气采样技术验证摘要

VIRA-PORE空气病毒采样盒

空气采样盒,用于收集病毒颗粒

具有ZePore™过滤器的Vira-Pore病毒采样盒经过专门设计和验证,可用于收集空气传播中的冠状病毒,并且它可用于采样其他类似的病毒。

目标

为了确定冠状病毒空气采样的合适参数,本验证采用直径37mm孔径1 µmPTFE层压ZePore空气病毒过滤器对冠状病毒的替代物--人类冠状病毒OC43HCoV OC43)进行空气采样。 人冠状病毒OC43和COVID病毒均为正向单链RNA+ ssRNAβ包裹的冠状病毒,因此OC43是合适的COVID病毒模拟物。 通常以往在过滤器上进行病毒采样的研究没有包括基本的验证数据,例如确定从过滤器上洗脱病毒的合适技术,在采样过程中或在运输及存储过程中病毒在过滤器上的稳定性等数据。

 

方法

标准化病毒空气采样的持续时间,提取洗脱的病毒RNA,然后用超微量核酸蛋白分析仪进行RNA定量(ng / µL为单位),采用荧光定量PCR仪对现场样品进行测试,所有实验均重复三次(除非另有说明)。实验结果采用病毒相对回收质量(relative recovery)来表示。病毒相对回收质量(RRmass)是从过滤器洗脱的病毒质量浓度(ng / ml)相对于初始雾化器悬浮液中病毒质量浓度(ng / ml)的比率。过滤器安装在开口式37mm三层导电聚丙烯盒中。导电盒优选用于空气微粒采样,以防止静电吸附到盒壁。空气流量初步设置为10 L / min,方便在短时间内较大程度地收集病毒。带有过滤器和支撑垫的压降为17英寸水压,与某些个人采样泵(例如Gilian 12GSA SG10SG10-2)兼容。空气样品以10 L / min的流量进行病毒颗粒空气采样10分钟,同时另一个样品采用对过滤器加标病毒颗粒悬浮液,两个样品均使用两种不同的方法对病毒RNA进行洗脱。两种情况下回收率均较高的洗脱方法都是将滤膜向内卷起来,然后将其放入装有1 mL MTM培养基(Longhorn Vaccines and Diagnostics™Inc。)的2 mL微量离心管中,并涡旋三次,每次涡旋10秒。雾化病毒悬浮液是使用Collison雾化器在II级生物安全柜中产生的。此过程产生的平均空气传播颗粒浓度为~1 x 10^8/ L。进行空气采样,采样10分钟,60分钟后,立即将滤膜中的病毒洗脱下来, 或采样10分钟将其暴露在清洁的气流中60分钟再洗脱病毒。 

结果

对于采样10分钟的样品,RNA质量浓度和RRmass(图1中的紫色条)分别为2.0 x 10^6 ng / mL±1.06 x 10^6)和0.55±0.18)。对于采样60分钟的样品,平均RNA质量浓度为5.98 x 10^6 ng / mL±1.79 x 10^6),调整采样时间后的RRmass(图1中的蓝色条)为0.32±0.10)。在采样10分钟的样品中,然后将其暴露在清洁的气流中60分钟,RNA质量浓度和RRmass(图1中的橙色条)分别为2.17 x 10^6 ng / mL±6.97 x 105)和0.50±0.16)。这些结果表明,在分别采样10分钟,60分钟和10分钟,然后暴露于清洁气流60分钟后,雾化病毒的回收率是相似的,差异无统计学意义(p = 0.31)。在另一个实验中,空气样本分别在4°C25°C下存储7天。在4°C下,RNA质量浓度为4.41 x 106 ng / mL±2.51 x 10^6),在25°C下存储时为1.34 x 10^6 ng / mL±8.23 x 105)。因此,房间存放条件下的平均浓度比冰箱存放条件下的平均浓度低3.3倍。由于实验的可变性,差异没有显着差异(p = 0.11)。如图1所示,4°C存储(绿色条)和25°C存储(黄色条)的RRmass分别为0.55±0.31)和0.17±0.10)。通过qRT-PCR进一步分析了上述每组实验中的一个洗脱样品,以显示总RNA分析方法未产生误导性结果。 对于这两个样品,检测到的RNA浓度相似:每毫升4.01 x 10^6 RNA拷贝(用于4°C储存)和每毫升4.18 x 10^6 RNA拷贝(用于25°C储存)。对于这两个样品,qRT-PCRCT值均高于30,是接近检测下限的Ct值。 这可以解释两个微量样品之间值的相似性,以及为什么与总RNA分析不同,两个样品之间的差异不明显。 在进行进一步工作之前,建议在分析之前将样品冷藏保存。

 

结论

•COVID病毒的替代物人类冠状病毒OC43HCoV OC43)被成功雾化,收集并回收用于分析。

与摇床方法相比,涡旋洗脱产生更高的RNA浓度。

在三种不同的采样场景(10分钟,60分钟和10分钟后暴露于60分钟的清洁气流)后,从过滤器中回收雾化病毒的差异没有显着差异。

比较在4°C25°C储存后病毒的回收率,与在25°C储存后相比,病毒在4°C储存后的回收率高约3倍; 但是,由于实验的可变性,差异没有统计学意义。

 

注意:VIRA-PORE病毒采样盒已经过测试可从COVID替代病毒中回收RNA病毒,但尚未测试过从COVID病毒中收集RNA病毒。 请参阅技术摘要说明的测试方法和测试结果。 客户应自己负责遵守(i)产品使用说明和(ii)收集空气传播的病毒后,与产品的使用和安全处理以及包装,标签和运输有关的所有适用的政府法律,规则,法规和行业标准。生产商建议您在进行任何空气采样之前,先向具有病毒专业知识的合格环境微生物实验室寻求指导。 寻求指导,安全的处理和运输程序,因为COVID病毒是高度传染性的病原体,如果暴露则具有重大健康隐患。

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