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今天主要来讲讲荧光定量PCR检测原理
荧光定量PCR光学检测系统:
1、光源:五个LED,各LED激发波长不同,保证每个通道的荧光素由优质的激发光激发。
2、探测器:CCD,确保整板同时检测,数据间可比性强。
3、激发波长范围:475nm-640nm。
4 发射波长范围:520nm-740nm。
5、五个检测通道:可同时能做四色检测。
6、线性范围:11个数量级。
7、灵敏度:可检测到单拷贝。
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法:
1、SYBRGreenⅠ法:
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图(单一峰图表明PCR扩增产物的单一性)。
2、TaqMan探针法:
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

上海睿玥实验器材有限公司主营产品:全自动熔点测定仪,梯度PCR基因扩增仪,平行反应合成仪
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